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比色計(jì)的概念與原理
發(fā)布時(shí)間: 2022-08-23  點(diǎn)擊次數(shù): 1040次

比色計(jì)的概念與原理

1.比色計(jì)的概念

比色計(jì)與光度計(jì)的概念不同,比色計(jì)是一種化學(xué)分析儀器。利用光線

分別透過(guò)標(biāo)準(zhǔn)溶液(或玻片)和試樣溶液而進(jìn)行比較顏色強(qiáng)度的儀器。用于比色分析。一般分為目視比色計(jì)和光電比色計(jì),而光度計(jì)是屬于后者。

2.比色計(jì)和光度計(jì)的比較

比色計(jì)是光度計(jì)中的一種,專(zhuān)門(mén)比色用. 光度計(jì)除比色外還可作其他應(yīng)用.

比色計(jì)特指可見(jiàn)光比色分析的檢測(cè)儀器;光度計(jì)可涵蓋紫外;可見(jiàn);紅外多個(gè)譜區(qū)。

區(qū)別主要有兩點(diǎn):1.單色器:比色計(jì)采用濾光片濾除其他的雜光,光線的純度低,精度差;分光光度計(jì)采用分光系統(tǒng)(光柵或菱鏡)獲取單色光,光線的純度高,精度好。2.比色計(jì)一般用于可見(jiàn)光,只有幾塊濾光片,使用范圍狹窄;分光光度計(jì)可在儀器工作波長(zhǎng)范圍之內(nèi)任意選取所需波長(zhǎng)

比色計(jì)簡(jiǎn)單,便宜,測(cè)定方便,就是結(jié)果精度不高,主要用于界限測(cè)定等方面;

光度計(jì)精密,貴重,測(cè)定結(jié)果精確。

兩種設(shè)備適用范圍不一樣,當(dāng)然比色計(jì)能做的光度計(jì)都能做,只是要看用在什么方面,有沒(méi)有這個(gè)必要。

3.比色計(jì)原理

比色計(jì)原理

當(dāng)單色光通過(guò)厚度相同,而濃度很小的溶液時(shí),根據(jù)朗伯—比爾定律,光被溶液吸收的程度,稱(chēng)為吸收度,與溶液的濃度成正比,與溶液的厚度成正比,即A=εCL,式中:A為吸收度,C為溶液的濃度,L為溶液的厚度,ε為消光系數(shù)。

由朗伯—比爾定律得,當(dāng)一束單色光通過(guò)一溶液時(shí),由于溶液吸收一部分光能,使光的強(qiáng)度減弱。若溶液的濃度(或厚度)不變,則溶液的厚度(濃度)愈大,光線強(qiáng)度的減弱也愈明顯。

用同樣的方法配制的標(biāo)準(zhǔn)溶液和待測(cè)溶液,其濃度分別為C1和C2,對(duì)同類(lèi)溶液ε相同,當(dāng)厚度也相同時(shí)則:

A1=εC1L

A2=εC2L

C2=(A2/A1)*C1


式中A1,A2可由羅維朋比色計(jì)直接讀出,C1為標(biāo)準(zhǔn)溶液的已知濃度,據(jù)此可算出待測(cè)溶液的濃度。

朗伯—比爾定律

許多化學(xué)物質(zhì)的溶液具有顏色(無(wú)色的化合物也可以加顯色劑經(jīng)反應(yīng)生成有色物質(zhì)),當(dāng)有色溶液的溶度改變時(shí),顏色的深淺也隨之改變,濃度愈大,顏色愈深。因此,可以用比較溶液顏色深淺的方法來(lái)測(cè)定有色溶液的濃度。這種方法叫做比色分析法。

一、 朗伯—比爾定律

當(dāng)一束單色光通過(guò)有色溶液時(shí),入射光線的一部分被器皿反射回來(lái),一部分被溶液吸收,另一部分則透過(guò)溶液,如圖所示。它們之間有以下關(guān)系:

Io=Ia+Ir+It      1-1

式中:Io—入射光強(qiáng)度,Ia—吸收光強(qiáng)度,Ir—反射光強(qiáng)度,It—透過(guò)光強(qiáng)度

由于在實(shí)際測(cè)定時(shí),所用的比色皿都是同質(zhì)料用規(guī)格的。反射光的強(qiáng)度為一定值,不會(huì)引起測(cè)量誤差,所以反射光的影響可以不加考慮。則上式可簡(jiǎn)化為:

Io=Ia+It        1-2

從式1-2可知:當(dāng)入射光強(qiáng)度Io為一定時(shí),被吸收光強(qiáng)度Ia愈大,則透過(guò)光強(qiáng)度It愈小。也就是說(shuō):光強(qiáng)度的減弱僅與有色溶液對(duì)光線的吸收有關(guān)。

那么,溶液對(duì)光線的吸收與哪些因素有關(guān)呢?實(shí)驗(yàn)證明:溶液的濃度C愈大,液層厚度L愈厚(即光線在溶液中所經(jīng)過(guò)的路程愈長(zhǎng)),則溶液對(duì)光線吸收的愈多。它們之間的關(guān)系有下式?jīng)Q定:

lg = KCL      1-3

這個(gè)公式就是朗伯—比爾(Lambert---Beer)定律。

公式中的K稱(chēng)為吸光系數(shù),它表示有色溶液在單位濃度和單位厚度時(shí)的吸光度。在入射光的波長(zhǎng)、溶液種類(lèi)和溫度一定的條件下,K為定值。吸光系數(shù)是有色化合物的重要特性之一,在比色分析中有著重要的意義。K值愈大,表示該物質(zhì)對(duì)光的吸收能力愈強(qiáng),濃度改變時(shí)引起吸光度的改變愈顯著,因此比色測(cè)定時(shí)靈敏度愈高。

朗伯-比爾定律即有色溶液對(duì)一定強(qiáng)度光的吸收程度,與液層厚度和溶液中有色物質(zhì)濃度的乘積成正比。其中朗伯定律說(shuō)明吸收光與厚度間的關(guān)系;比爾定律說(shuō)明吸收光與濃度間的關(guān)系。

朗伯—比爾定律在光電比色計(jì)中的應(yīng)用

假定有兩種有色溶液,其中一種是已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液,另一種是待測(cè)溶液。根據(jù)公式:

在標(biāo)準(zhǔn)溶液中:As=KsCsLs 1-4

在待測(cè)溶液中:Ax=kxCxLx 1-5

將式1-4除以式1-5可得:

= 1-6

如果上述兩種溶液的液層厚度相等、溫度相同而且是同一種物質(zhì)的兩種不同濃度的溶液,測(cè)定時(shí)所選用的單色光的波長(zhǎng)亦相同,則有:

Ls=Lx、Ks=Kx ,代入式1-6可得:

= 1-7

由此可見(jiàn),在上述條件下,吸光度與濃度成正比。這一關(guān)系式就是光電比色計(jì)的設(shè)計(jì)依據(jù),也是比色分析的基本計(jì)算公式之一。式中標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度Cs為已知,As和Ax可用光電比色計(jì)測(cè)量出來(lái),則待測(cè)溶液的濃度Cx即可求出:

Cx = × Cs 1-8

由于在實(shí)際測(cè)定時(shí),標(biāo)準(zhǔn)溶液和待測(cè)溶液都要加以稀釋?zhuān)以趫?bào)告結(jié)果時(shí),多以100毫升(或1000毫升)中的含量來(lái)表示。因此,在實(shí)際計(jì)算時(shí),就需要在上式中乘上稀釋因數(shù)。

求待測(cè)溶液濃度的方法有:直接比較法(計(jì)算法)、因數(shù)法和標(biāo)準(zhǔn)曲線法三種。這些方法在“生物化學(xué)及生物化學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)"課程中有介紹。

波長(zhǎng)的選擇:

由于有色溶液對(duì)光的吸收具有選擇性,因此進(jìn)行比色測(cè)定時(shí),濾光片必須加以選擇,


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